體外哺乳動物細胞基因突變試驗儀

　　體外哺乳動物細胞基因突變試驗儀
 

　　一、 儀器介紹
 

　　實驗目的：
 

　　本試驗用于檢測受試物對體外培養(yǎng)的哺乳動物細胞的基因突變作用,包括堿基對突變、移碼突變和缺失等,從而評價受試物引起突變的可能性
 

　　實驗概述：
 

　　本試驗屬正向突變試驗,可檢出堿基置換型致突變物和移碼型致突變物。在加入和不加入代謝活化系統(tǒng)的條件下,使細胞暴露于受試物一定時間,然后將細胞傳代培養(yǎng)。胸苷激酶水平正常的細胞對(trifluorothymidine,TFT)等敏感,因而在培養(yǎng)液中不能生長分裂,突變細胞則不敏感,在含有的選擇性培養(yǎng)液中能繼續(xù)分裂并形成集落。相似的磷酸核糖基酶(HPRT)正常的細胞對 6-硫代(6-thioguanine,6-TG)敏感,突變的細胞則不敏感,在含有 6-硫代的選擇性培養(yǎng)液中可生長形成集落。基于突變集落數(shù),計算突變頻率以評價受試物的致突變性。
 

　　應用范圍
 

　　應用于科研、農業(yè)、衛(wèi)生、教育、霧霾狀態(tài)可吸入顆粒染毒效果研究等各個領域
 

　　符合標準：
 

　　GB/T 15670.20-2017《農藥登記毒理學試驗方法第20部分:體外哺乳動物細胞基因突變試驗》
 

　　二、試驗流程
 

　　1）細胞培養(yǎng):
 

　　選擇合適細胞系(如L5178Y、CHO)，常規(guī)傳代培養(yǎng)
 

　　2）受試物處理:
 

　　暴露于不同濃度受試物(需設陰性/陽性對照)
 

　　3）表達期:
 

　　預留足夠時間(通常7-10天)使突變表型顯現(xiàn)。
 

　　4.）突變體篩選:
 

　　TK試驗:使用(TFT)篩選TK突變體。
 

　　HPRT試驗:使用6-硫代(6-TG)選HPRT突變體。
 

　　5）克隆形成分析:
 

　　計數(shù)突變集落，計算突變頻率(突變集落數(shù)/存活細胞數(shù))
 

　　6）數(shù)據(jù)統(tǒng)計:
 

　　與對照組比較，判斷突變率是否顯著增加。
 

　　三、注意事項
 

　　1）細胞活力控制:受試物濃度需保證細胞存活率(通常>50%)
 

　　2）代謝活化系統(tǒng):需加入S9混合物(模擬體內代謝，(如Aroclor 1254誘導的大鼠肝S9)。
 

　　3）假陽性/陰性:避免pH、滲透壓等非特異性因素干擾。
 

　　4）合規(guī)性:   遵循國際指南(如OECD 490、ICH S2R1)。
 

　　計算：